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熒光定量PCR儀選擇誤區(qū)

更新時間:2021-08-16瀏覽:1133次
   Archimed Mini 16熒光定量PCR儀因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。在實(shí)驗(yàn)技術(shù)成熟的今天,也許對你來說,最難得不是實(shí)驗(yàn)技術(shù)上的問題而是選擇哪一種Archimed Mini 16熒光定量PCR儀,你要征詢實(shí)驗(yàn)室成員的意見、分析實(shí)驗(yàn)室目前乃至將來的需求、平衡實(shí)驗(yàn)室的預(yù)算,更要詳細(xì)研究各種宣傳資料。面對各種不同性能的產(chǎn)品,您又該如何選擇呢?首先建議大家走出認(rèn)識熒光定量PCR的兩個誤區(qū):
 
  誤區(qū)一:儀器通道越多越好
 
  隨著PCR技術(shù)的成熟運(yùn)用,多重擴(kuò)增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。從最初ABI公司推出的單通道熒光定量PCR儀發(fā)展到如今各個廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀,眼花繚亂的選擇讓人無所適從,就有人一不小心走進(jìn)了“通道越多越好”的誤區(qū)??紤]多重?zé)晒舛縋CR的通道數(shù)的時候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā),多重PCR并非人人適用、人人可用,因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了。
 
  誤區(qū)二:Archimed Mini 16熒光定量PCR儀無需梯度功能
 
  對于使用染料法的定量PCR反應(yīng),雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計(jì)軟件或者經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算熔解溫度(Tm值),但運(yùn)用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差異會很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變?nèi)f化,對于特殊片斷,經(jīng)驗(yàn)公式得到的數(shù)據(jù)不一定能得出準(zhǔn)確的結(jié)果,退火溫度細(xì)微的差異對結(jié)果都可能產(chǎn)生決定性的影響,因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問題。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問題,在反應(yīng)過程中每個孔的溫度控制條件可以在范圍內(nèi)按照梯度變化,根據(jù)結(jié)果,一步就可以摸索出適合的反應(yīng)條件。
 
  使用有梯度功能的熒光定量PCR可以一次完成以往多次實(shí)驗(yàn)才能完成的優(yōu)化過程,簡化了摸索PCR反應(yīng)條件的繁瑣實(shí)驗(yàn),既節(jié)省實(shí)驗(yàn)時間提高效率,又節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本。

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